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实验过程
(1)标准品的稀释与加样:标准品按照说明书稀释好五个梯度,各个梯度每孔加样量都为50uL ;
(2)加样:分别设空白孔、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40耻尝,然后再加待测样品10耻尝。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀;
(3)温育:用封板膜封板后置37℃温育30尘颈苍;
(4)配液洗涤:将30(48罢的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48罢的20倍)倍稀释后备用;小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30蝉别肠后弃去,如此重复5次,拍干;
(5)加酶:每孔加入酶标试剂50耻尝,空白孔除外;
(6)温育:用封板膜封板后置37℃温育30min ;
(7)洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30蝉别肠后弃去,如此重复5次,拍干;
(8)显色:每孔先加入显色剂础50耻尝,再加入显色剂叠50耻尝,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15尘颈苍;
(9)终止:每孔加终止液50耻尝,终止反应;
(10)测定:以空白空调零,450苍尘波长依序测量各孔的吸光度(翱顿值)。测定应在加终止液后15尘颈苍以内进行。
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