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处死动物后迅速取材(如小鼠脑、肝脏等),用预冷PBS(0.01 M, pH 7.4)漂洗去除血液及杂质
剔除脂肪、血管及结缔组织,滤纸吸干水分,称重(推荐组织量:0.1–1 g)
短期保存可置于-80℃冻存
常用介质:预冷笔叠厂或生理盐水(组织重量:介质体积=1:9)
特殊需求可添加蛋白酶抑制剂或贰顿罢础
?手工研磨?:玻璃匀浆器冰浴中上下研磨6–8分钟
?机械匀浆?:组织捣碎机(10,000–15,000 rpm,间歇操作避免过热)
?超声匀浆?:适用于小样本(需控制功率和时间)
匀浆液4℃下12,000 ×g离心15分钟,取上清
必要时用纱布或滤膜过滤去除脂质及碎片
检测蛋白浓度或酶活性以评估匀浆效果
分装后-80℃保存,避免反复冻融
?全程低温操作?:冰浴维持,防止蛋白降解
?避免过度剪切?:尤其对膜蛋白或细胞器研究需控制匀浆强度
?缓冲液适配性?:根据实验目标调整辫贬及离子浓度
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